推荐使用条件
储存缓冲液:20 mmol/L Tris-HCl (pH8.0), 100 mmol/L KCl, 1 mmol/LDTT, 0.1 mmol/L EDTA, 0.5% NP-40, 0.5% Tween20, 50% (v/v)甘油。
10×PCR Buffer:100 mmol/L Tris-HCl(pH9.0), 500 mmol/L KCl, 0.5%NP- 40, 0.5% Tween-20, 15 mmol/L MgCl2。
注意事项:
1)失活或抑制:酚氯仿抽提可以使Taq DNA 聚合酶失活,加入脱氧胆酸钠至0.06%,SDS至0.01%,或sarkosyl至0.02%均可以抑制Taq DNA 聚合酶
- 除了酶活性丧失外,下列因素也可能导致扩增失败
a、模板太多或太少;
b、样品中存在 Mg2+络合剂,导致 Mg2+实际浓度过低;
c、PCR 仪温度不准;
d、样品中含有未知的 Taq 酶抑制剂;
e、引物部分降解;
f、dNTP 部分降解;
g、Taq 酶用量太大等。